常见的HPLC故障及排除方法

仪器资料 · 发表于 2017-7-18 09:28:01

常见的HPLC故障及排除方法

诊状	可能的原因	解决方法
(一) 保留时间变化	1.柱温变化	柱恒温
	2.等度与梯度间未能充分平衡	至少用10倍柱体积的流动相平衡柱
	3.缓冲液容量不够	用>25mmol/L的缓冲液
	4.柱污染	每天冲洗柱
	5.柱内条件变化	稳定进样条件,调节流动相
	6.柱快达到寿命	采用保护柱
(二) 保留时间缩短	1.流速增加	检查泵,重新设定流速
	2.样品超载	降低样品量
	3.键合相流失	流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向
	4.流动相组成变化	防止流动相蒸发或沉淀
	5.温度增加	柱恒温
(三) 保留时间延长	1.流速下降	管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡
	2.硅胶柱上活性点变化	用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱
	3.键合相流失	同前(二)3
	4.流动相组成变化	同前(二)4
	5.温度降低	同前(二)5
(四) 出现肩峰或分叉	1.样品体积过大	用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%
	2.样品溶剂过强	采用较弱的样品溶剂
	3.柱塌陷或形成短路通道	更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件
	4.柱内烧结不锈钢失效	更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品
	5.进样器损坏	更换进样器转子
(五) 鬼峰	1.进样阀残余峰	每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗
	2.样品中未知物	处理样品
	3.柱未平衡	重新平衡柱,用流动相作样品溶剂 (尤其是离子对色谱)
	4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱)	每天新配,用抗氧化剂
	5.水污染(反相)	通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水