动物细胞培养大全

发表于 2017-7-4 23:31:04

动物细胞培养大全

细胞培养基本条件................................................................................................................................. 4
细胞培养基种类与基本成分................................................................................................................. 5
液体培养基保存：......................................................................................................................... 8
血清................................................................................................................................................. 8
细胞培养环境...................................................................................................................................... 10
1、实验室设计............................................................................................................................. 10
2、常用设施及设备..................................................................................................................... 11
3、培养器皿................................................................................................................................. 11
4、细胞培养温度.........................................................................................................................13
5、合适的气体环境.....................................................................................................................13
细胞培养无菌操作基本技术............................................................................................................... 14
工作环境的处理.................................................................................................................................. 14
细胞培养所用玻璃及塑料制品的清洗与消毒................................................................................... 16
消毒...................................................................................................................................................... 19
常用物品消毒压力及时间：............................................................................................................... 20
细胞培养的污染及控制....................................................................................................................... 21
1）污染的类型............................................................................................................................. 21
一、细菌污染....................................................................................................................... 21
二、真菌污染....................................................................................................................... 21
三、支原体污染................................................................................................................... 21
四、病毒污染....................................................................................................................... 22
（2）污染来源及鉴别...............................................................................................................22
一、污染来源....................................................................................................................... 22
二、污染的鉴别................................................................................................................... 23
（3）污染的清除和预防.............................................................................................................24
一、污染的清除................................................................................................................... 24
二、污染的预防................................................................................................................... 24
培养细胞的冷冻保存与复苏............................................................................................................... 25
..... 25
􀂄 概述....................................................................................................................................26
􀂄􀂂􀂂􀂂􀂂􀂂冷冻保存与复苏原理 ...................................................................................................... 27
♦ 冷冻速率....................................................................................................................28
♦ 冷冻保存温度............................................................................................................29
♦ 复苏速率....................................................................................................................30
♦ 冷冻保护剂................................................................................................................30
􀂄􀂂􀂂􀂂􀂂􀂂􀂂 冷冻保存方法 ............................................................................................................31
♦ 非玻璃化冻存方法....................................................................................................32
􀂗 主要材料....................................................................................................................32
􀂗 操作过程....................................................................................................................32
􀂗 冻存结果.................................................................................................................... 33
􀂗 讨论............................................................................................................................34
♦ 玻璃化冻存方法........................................................................................................34
􀂗 主要材料.................................................................................................................... 34
􀂗 冻存过程.................................................................................................................... 35
􀂗 冻存结果.................................................................................................................... 36
􀂗 讨论............................................................................................................................36
􀂄􀂂􀂂􀂂􀂂􀂂􀂂 冻存细胞的复苏 ........................................................................................................ 36
♦ 非玻璃化冻存的复苏方法........................................................................................ 36
􀂗 主要材料.................................................................................................................... 36
􀂗 复苏过程.................................................................................................................... 37
􀂗 结果............................................................................................................................37
􀂗 讨论............................................................................................................................37
􀂄􀂂􀂂􀂂􀂂􀂂􀂂 玻璃化冻存的复苏方法 ............................................................................................ 38
􀂗 主要材料.................................................................................................................... 38
􀂗 操作过程.................................................................................................................... 38
􀂗 结果............................................................................................................................39
􀂗 讨论............................................................................................................................39
细胞培养常见问题及回答................................................................................................................... 39
如何选用特殊细胞系培养基？...................................................................................................39
L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？ ...................................................40
GlutaMAX-I是什么？培养细胞如何利用GlutaMAX-I？这个二肽有多稳定？ ..................... 40
什么培养基中可以省去加酚红？...............................................................................................40
如何用台盼兰计数活细胞？.......................................................................................................41
如何消除组织培养的污染？.......................................................................................................41
Tech tips........................................................................................................................................46
细胞培养从头学.................................................................................................................................. 47
常用设备.......................................................................................................................................47
无菌操作.......................................................................................................................................47
玻璃器械洗消：...........................................................................................................................48

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发表于 2017-7-4 23:31:25

一、新的玻璃器皿的洗消：...............................................................................................48
细胞培养用液的配制与消毒.......................................................................................................50
一. 水的制备........................................................................................................................50
二.PBS的制备与消毒(也可用于其它BSS，如：Hanks，D-Hanks液的配制)：............. 50
三. 胰蛋白酶溶液的配制与消毒：....................................................................................50
四.青、链霉素溶液的配制于消毒......................................................................................50
五.RPMI1640 的制备与消毒： ...........................................................................................50
六．血清的灭活：...............................................................................................................51
七.HEPES溶液： .................................................................................................................51
八.谷氨酰胺：......................................................................................................................51
九.肝素溶液的配制：..........................................................................................................52
十. Ⅰ型胶原酶：................................................................................................................52
十一.明胶溶液：..................................................................................................................52
注意事项：...........................................................................................................................52
细胞传代培养（消化法）...........................................................................................................52
一. 传代前准备：................................................................................................................53
二.胰蛋白酶消化；.............................................................................................................. 53
三.吹打分散细胞：..............................................................................................................53
四.分装稀释细胞：..............................................................................................................53
五.继续培养：......................................................................................................................54
传代细胞培养注意事项：...................................................................................................54
细胞的复苏...................................................................................................................................54
细胞计数.......................................................................................................................................55
细胞的冻存...................................................................................................................................57
细胞培养技术中的关键因素............................................................................................................... 58
上皮细胞培养...................................................................................................................................... 59
1）表皮细胞培养.........................................................................................................................59
2）乳腺组织培养..................................................................................................................... 59
3）胃上皮细胞培养................................................................................................................. 60
4）肝细胞培养......................................................................................................................... 60
5）内皮细胞培养.........................................................................................................................61
6）毛细血管内皮细胞培养.........................................................................................................61
神经组织细胞培养............................................................................................................................... 62
结缔组织类细胞培养........................................................................................................................... 63
1）成纤维细胞培养.....................................................................................................................63
2）巨噬细胞培养..................................................................................................................... 63
肌组织细胞培养.................................................................................................................................. 63
1）骨骼肌细胞培养.....................................................................................................................63
2）肌细胞培养......................................................................................................................... 64
细胞凋亡的几种检测方法................................................................................................................... 64
一、形态学观察方法...................................................................................................................64
二、DNA凝胶电泳......................................................................................................................64
三、酶联免疫吸附法（ELISA)核小体测定..............................................................................65
四、流式细胞仪定量分析...........................................................................................................65
■检测细胞膜成分变化的Annexin V 联合PI法........................................................................ 66
培养细胞染色体显示法....................................................................................................................... 67
1）传代培养细胞染色体显示法............................................................................................. 67
2）人末梢血微量全血培养染色体显示法............................................................................. 67
3）羊水细胞培养..................................................................................................................... 68
特殊培养法.......................................................................................................................................... 68
1）二倍体细胞培养法.................................................................................................................68
2）支持物培养法..................................................................................................................... 69
3）细胞分离（克隆）培养..................................................................................................... 69
4）球体细胞培养.........................................................................................................................70
5）微载体细胞培养法.................................................................................................................70
6）悬浮培养法............................................................................................................................. 71
实验室常用细胞目录........................................................................................................................... 71
细胞目录大全...................................................................................................................................... 76
人类组织正常及永生化细胞.......................................................................................................76
人类组织肿瘤细胞.......................................................................................................................78
动物组织正常及及永生化细胞...................................................................................................81
动物组织肿瘤细胞.......................................................................................................................83