沃特世2695-2489HPLC 系统操作规程

仪器资料 · 发表于 2017-7-13 19:01:40

沃特世2695-2489HPLC 系统操作规程
新色谱柱的安装和平衡
使用新色谱柱前需要对色谱柱进行润湿和平衡，注意确保您所使用的流动相和色谱柱储存溶剂“相溶”。Symmetry/Sunfire反相色谱柱是在100%乙腈中储存的。
a)依次用水和乙腈（或甲醇）冲洗液相色谱泵系统中含有缓冲盐的流路，然后将色谱柱按照标签上的箭头方向`` 连接到进样器或保护柱的出口端，标签上的箭头指向检测器流向(先不要接检测器)。
b)在0.1ml/min流速条件下用100%纯甲醇或乙腈冲洗色谱柱，然后在5分钟内将流速升至1 ml/min。
c)当溶液均匀地从柱子出口流出时，停掉流速，将色谱柱出口端接到检测器上（这样操作可以避免气泡进入检测系统，并且可快速达到基线平衡）。
d)按照步骤b)的方法逐渐提高流速。
e)当压力达到稳定值并且基线平稳后，缓慢降低流速，停泵。
f)用5:95乙腈:水（体积比）冲洗色谱柱30分钟(注意流速要从0.1 ml/min缓慢上升至1 ml/min)。
g)换上含有离子对试剂的流动相，对色谱柱进行平衡，直到基线平稳。
h)进标准溶液和样品溶液进行分析。

色谱柱的再生
n 保留时间漂移或者分离度发生变化往往说明色谱柱被污染了，用纯有机溶剂(乙腈或甲醇)冲洗色谱柱通常可以洗去污染物。
n 根据样品的干净程度定期更换保护柱，压力逐渐增加或者出现分叉峰往往表明需要更换保护柱了。如果保护柱更换后问题依然存在，说明色谱柱被强吸附的污染物堵塞，这时需要选择合适的溶剂来溶解这些污染物，比如，变性蛋白可以通过反复几次进200μl DMSO来清洗。
n 如果上述方法还是不能解决问题，可以换用一系列疏水性逐渐增强的溶剂来清洗色谱柱。更换溶剂的顺序可以为：水－四氢呋喃－二氯甲烷－四氢呋喃－水。

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