毛细管电泳分离影响因素及条件优化

仪器资料 · 发表于 2017-8-3 14:39:07

毛细管电泳分离影响因素及条件优化

分离条件的优化是电泳实验中最重要也是最难的工作。可按以下途径入手：分析样品的来源、类型、组成及其生物和理化性质；据样品的性质，选择分离模式，确定检测方法；据样品解离常数计算最佳pH；据所需pH选择缓冲体系，进一步优化pH、缓冲液浓度等；优化其他参数，如分离电压和温度等；确定是否需要添加剂或非水溶剂等。
对于实验条件的优化，影响分离的因素非常关键。缓冲溶液的类型、pH、浓度（离子强度）等是最为重要的几个因素。相同的 pH下，不同缓冲体系的分离效果可能相差甚远。缓冲试剂及pH调节剂的浓度也需要优化。缓冲溶液要有一定的pH调节范围和足够的缓冲容量；尽量选择浓度高而产生电流小的缓冲溶液；缓冲液的表观淌度（单位电场强度下离子的平均电泳速度称为淌度）与样品组分接近。分离效果的评价上需关注电渗流、分离速度、分离选择性、分离度等。
电渗流可控制组分的迁移方向和速度，进而影响分离效率和重现性，所以电渗的控制是电泳研究的关键。如下公式所示，一般地，所有能改变电动势ξ、介电常数ε和粘度η的任何直接或间接的因素都可能用来控制电渗，直接因素如分离电场E、粘度η、介电常数和电动势ζ等；间接因素有：缓冲液的组成和pH、温度、管壁性质、外加电磁场等。其中温度和缓冲液的组成通过影响粘度η、介电常数ε和管壁的ξ电势等来影响电渗。外加电磁场则通过改变管壁表面的电荷数量及其分布来改变电渗。

请点击此处下载

请先注册会员后在进行下载

已注册会员，请先登录后下载