HPLC流动相选择的技巧

仪器资料 · 发表于 2017-6-28 09:02:40

HPLC流动相选择的技巧

液相色谱的柱子通常正相柱和反相柱。正相柱以硅胶为柱，或是在硅胶表面键合-CN,-NH3
等官能团的键合相硅胶柱；反相柱填料主要以硅胶为基质，在其表面键合非极性的十八烷基
官能团（ODS）称为C18 柱，其它常用的反相柱还有C8,C4,C2 和苯基柱等。另外还有离子
交换柱，GPC 柱，聚合物填料柱等。本文重点介绍反相色谱柱的选择和使用：
一、反相色谱柱的选择
1．柱子的PH 值使用范围
反相柱优点是固定相稳定，应用广泛，可使用多种溶剂。但硅胶为基质的填料，使用时
一定要注意流动相的PH 范围。一般的C18 柱PH 值范围都在2-8，流动相的PH 值小于2
时，会导致键合相的水解；当PH 值大于7 时硅胶易溶解；经常使用缓冲液固定相要降解。
一旦发生上述情况，色谱柱人口处会塌陷。同样填料各种不同牌号的色谱柱不尽相同。如果
流动相PH 较高或经常使用缓冲液时，建议选择PH 范围大的柱子，例如戴安公司的Acclaim
柱PH 2-9 或Zorbax 的PH 2-11. 5 的柱子。

……
3. 色谱柱的维护
a．使用预柱保护分析柱（硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度）
b．大多数反相色谱柱的pH 稳定范围是2－7.5，尽量不超过该色谱柱的pH 范围
c．避免流动相组成及极性的剧烈变化
d．流动相使用前必须经脱气和过滤处理
e．如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕柱子冲洗干净，并保存
于甲醇或乙腈中
f．氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性，故使用时要注意，柱及连接管内不能长时间存
留此类溶剂，以避免腐蚀。