用LC-MS/MS测定动物源食品中孔雀石绿前处理方法及注意事项

仪器资料 · 发表于 2018-7-3 11:05:18

用LC-MS/MS测定动物源食品中孔雀石绿前处理方法及注意事项
（一）未加工水产品（此过程可以和沙星，磺胺测定前处理合并，减少工作量）：
1.称取5 g(精确至0.01g)制备好的试样，置于50mL塑料具塞离心管中，依次加入内标标准溶液，加入20mL提取液(2%甲酸乙腈)振荡提取2min，5000r/min离心3min，取上清液备用，残渣用20mL乙腈重复提取两次，合并上清液，45℃旋转蒸发（或氮吹）至近干，用流动相定容至5mL (若含油脂较多用乙腈饱和正己烷去油)，混匀，过0.22 μm滤膜后，用LCMSMS分析。
（二）加工水产品：
称取5 g(精确至0.01g)制备好的试样，置于50mL塑料具塞离心管中，依次加入内标标准溶液，乙酸铵缓冲溶液，盐酸羟胺溶液，对-甲苯磺酸溶液，振摇后加入30mL乙腈，振摇2min,以5000 r/min离心3min，将上清液转移到250mL分液漏斗中，用30 mL 乙腈重复提取残渣一次，合并上清液。分液漏斗中加入50mL二氯甲烷，30mL水，振摇2min，静置分层(静止时间不超过10min),收集下层有机层于250mL 梨形瓶中,45℃旋转蒸发至近干。加入5mL 乙腈，漩涡振荡器，溶解残渣，转移至15ml离心管中。再加入5mL乙腈饱和的正己烷，涡旋30s后静置分层，弃去上层正己烷层。如有需要，重复上述操作。
将下层乙腈层直接过预先活化好的中性氧化铝串联阳离子交换柱，控制阳离子交换柱流速不超过0.6mL/min，再用2 mL乙腈淋洗中性氧化铝柱后，弃去中性氧化铝柱。依次用3 mL2%甲酸溶液、3 mL乙腈淋洗阳离子交换柱，弃去流出液。用4mL洗脱液洗脱，洗脱流速控制为1 mL/min，用10mL 刻度试管收集洗脱液，用稀释液定容至5mL,混匀,过0.22 μm滤膜过滤后用LCMSMS分析。
（三）质控：
1. 同时做方法空白和加标实验。方法空白<0.2μg/kg,仪器至多间隔10针进1针方法空白。
2.标准曲线的回归系数大于等于0.995.
3.QC溶液的回收率应在80%-120%,仪器至多间隔10针进1针QC.
4.样品加标试验的回收率在70%-130%。
5.超过定量限的样品，进行双样定量分析, 相对百分比差值小于20％。
6. 同一批样品相同基质的至少选取一个样品做平行样。
（四）注意事项：
在样品前处理时候，要防止交叉污染。
1.在制样时，制样容器和萃取时所用分液漏斗等用无水乙醇再清洗一遍，晾干后使用。
2.在前处理过程中离心管标识不能使用油性记号笔标识，容易造成污染，可以使用铅笔标识。
3.氮吹针清洗后用马弗炉450度烘2h后使用，或者用无水乙醇超声清洗三次后使用。
4.标品要避光，在加标时操作要尽量快，标准曲线从高浓度到底浓度依次配制，以防止低浓度标液暴露时间过长而检测不到进而影响定量的准确性。此外，进样器的温度也要设置在4-8℃，避光。且样品瓶用棕色的。