AMAMFSAc19046 蜂蜜高果糖玉米糖浆薄层色谱法

仪器资料 · 发表于 2018-6-12 17:55:08

1.仪器和试剂
1.1 仪器
(a)木炭柱-使用的柱子及吸附剂同19-41B。将细玻璃棉塞塞在柱的下端，关闭柱的下端口，柱中装适量水。打开下口，让水流过柱子，以除去空气泡。当水处于玻璃棉以上的体积大约为1Oml时关闭柱下口；然后将助滤剂糊浆加入，使其高度约为1cm，并使其自然沉降。然后将12g吸附剂与15Oml水配成的浆倒入，排溶剂5min。加27.6kPa的压力直到吸附剂表面稳定，然后加6gkPa压力。真空从柱填料上层抽去过量的吸附剂，再加1-2cm助滤剂浆，分别用5OOml水和2O0ml 50%乙醇洗柱子，在洗完后在该介质中柱子可以保存。使用前用250ml水洗柱子(可使用真空法加速流速，加压法更好)。在69kPa下流速一般为8.5ml/min。
(b)薄层板——涂250mm厚的硅胶G，保干器中保存。
1.2 试剂
(a)溶剂——正丁醇-乙酸-水(2+1+1)。
(b)显色剂——将1ml重蒸苯胺和1g二苯胺溶解于50ml丙酮中；加5ml H3PO4。若苯胺水重蒸，则可按下述方法配制:将1g苯胺溶于5Oml丙酮中，用脱色炭脱色。并稀释至5Oml，加二苯胺及H3PO4。每天新配制或保存在O℃。
2.试验过程
(a)样品的制备——称量1g(至毫克位)样品至30或5Oml烧杯中，加1Oml水溶解，并加到柱的上端，用抽气法使样品进入到柱中，但应注意不要让柱流干。用2个5ml洗烧杯，并使其进入到柱中。用300ml 7%乙醇洗，弃去流出液，然后用100ml 50%乙醇洗，流出液收集在5Oml烧杯中并于蒸汽浴上蒸发，可用空气、氮气流或其它合适方法加速蒸发速度。
将残留固体用1ml水分次转移至13×1O0mm试管中。在空气或氮气流下于大约60℃的水浴中蒸发至干。将固体再溶解在0.1-0.2ml水中。
(b)色层分析——在放入薄板之前15min将溶剂放入展开缸中。点2和6(2×3或3×2)μl的试液到薄板上，再点上纯的和掺杂蜂蜜的控制点，控制样溶液可通过冷冻或干燥处理加以保存。将点过样的薄板放进展开缸直到溶剂前沿爬到薄层的顶部。取出薄板，干燥，充分喷显色剂(注意:避免接触喷雾器)。让丙酮挥发掉，然后将薄板放在烘箱中于90-95℃烘烤；直到斑点明显出来(约7-1Omin)。
(c)结果分析——纯蜂蜜有1个或2个大的蓝灰或蓝棕色点，Rf＞0.35。由原点展出来的任何蓝色条纹或一系列点都是玉米糖浆、高果糖玉米糖浆(HFCS)或来自植物的高果糖糖浆存在的推定证据。在这种情况下，必须进行进一步实验以确定掺杂物。按下述方法重复木炭柱预处理：按(a)制备样品，不同的是用1O0ml 25%乙醇洗柱子，弃去流出液，再用50%乙醇洗。在此处理步骤之后，若在TLC上仍有由原点伸展出来的蓝色条纹或一系列斑点，则可以肯定有掺杂物存在。